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    細胞培養你會遇到哪些問題

    發布時間:2022-09-08      點擊次數:202
      細胞培養的過程控制有點像走鋼絲,要在最短的時間內,通過細胞培養的方法獲取更高的產量,則必須謹慎且連續地控制工藝過程中的參數;若過程管理出現失誤,將導致生產效率下降、運行時間延長;更糟糕的,可能會導致整個批次的細胞培養失敗。
      你在細胞培養的過程中,會遇到哪些問題
      1、首先講一下細胞生長緩慢的原因:
      a)更換了血清或者培養基,細胞需要一段時間適應一下;
      b)由于細胞的特殊種類,培養基中缺少某些生長因子;
      c)培養基中有少量真菌或者細菌污染;
      d)傳代的時候細胞密度過低;
      e)細胞狀態老化;
      2、解決上述問題的方法:
      a)如果實驗室沒有某種細胞最適宜的培養基,可以先用原培養條件凍存一些,然后逐漸增加新的培養基比例,25%、50%、75%到100%,傳代3-5次后,讓細胞慢慢適應。
      b)判斷是不是培養基發生污染,可以先不加抗生素,觀察細胞狀態。
      c)增加細胞的接種密度。
      d)發現細胞老化的時候,及時更換新的細胞。
      e)如果懷疑是支原體污染,一定要隔離疑似污染的培養皿,及時清潔消毒孵箱。
      3、造成細胞死亡的原因:
      a)細胞消化過度;
      b)沒有及時換液,營養成分消耗殆盡;
      c)如果前一天細胞的狀態很好,換液之后就全死了,應該考慮是否是培養基或者血清的問題。
      4、如何判定細胞是否發生支原體污染:可以選用直接培養法、熒光染色或PCR方法檢測,比較常用的是PCR。當細胞發生支原體污染時,原則上是能夠去除支原體的,但是整個過程耗時耗力,還要考驗個人操作能力。所以如果不是處于細胞存量很少的情況下,建議發現污染時立刻棄掉,重新培養。
      5、如果孵箱中只是某種細胞持續性大量死亡,而其他細胞狀態都沒問題的話,基本上可以確定就是孵箱存在特異性感染這類細胞的真菌或細菌。
      6、其他注意事項:每個星期都要更換孵箱底盤中的水(紫外照射后超純水);每兩周消毒一次孵箱:75%酒精擦拭一遍后,再用0.1%新潔爾滅擦拭一遍(都用超純水配制);可以在孵箱底部放一個燒杯,里面放入飽和硫酸銅,可以抑制霉菌生長。不過也有人說硫酸銅會改變孵箱的PH值,如果不是孵箱污染的情況很嚴重,建議不要使用。
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